De rivier scheidt in de Griekse mythologie de bovenwereld van de onderwereld. Wie in het dodenrijk van Hades rust wilde, moest zich door veerman Charon laten overvaren. Nabestaanden legden vaak een munt (obool) in de mond van de overledene. Tol voor de overtocht. Wie geen munt in de mond had was gedoemd tot het eind der tijden langs de rivieroever te dwalen.
Thetis dompelde haar zoon Achilles in de rivier onder. De Styx zou namelijk onsterfelijk maken. Goden legden bij de rivier vaak belangrijke eden af. De rivier werd ook wel Acheron genoemd.